Tipos de PCR (reação em cadeia da polimerase)

A reação em cadeia da polimerase (PCR) é uma técnica versátil de biologia molecular usada para amplificar sequências específicas de DNA ou RNA. Ao longo dos anos, vários tipos de PCR foram desenvolvidos para atender às diferentes necessidades de pesquisa e diagnóstico. Aqui estão alguns tipos comuns de PCR:

1. PCR convencional: Este é o método PCR padrão que envolve ciclos de desnaturação, recozimento e extensão. É usado para amplificação geral, sequenciamento e clonagem de DNA.
2. PCR de Transcrição Reversa (RT-PCR): RT-PCR é usado para amplificar RNA em DNA complementar (cDNA) e é frequentemente usado para estudar a expressão gênica. Duas variações comuns incluem RT-PCR quantitativo (qRT-PCR) para quantificar os níveis de RNA e RT-PCR aninhado para aumentar a sensibilidade.
3. PCR em tempo real (qPCR): A PCR em tempo real permite a quantificação de DNA ou RNA durante o processo de amplificação. É amplamente utilizado para análise de expressão gênica, quantificação de carga viral e genotipagem.
4. PCR Multiplex: A PCR multiplex amplifica múltiplas sequências alvo em uma única reação. É valioso para detectar múltiplos patógenos ou genotipar múltiplos loci simultaneamente.
5. PCR aninhado: Nested PCR envolve duas rodadas de amplificação, onde o produto da primeira PCR serve de modelo para a segunda. É usado para aumentar a especificidade e a sensibilidade, especialmente quando se trabalha com DNA degradado ou com poucas cópias.
6. PCR de início quente: Hot start PCR usa DNA polimerases modificadas que são inativas em temperaturas mais baixas. Isto evita a amplificação não específica durante as fases iniciais da PCR e é particularmente útil quando se trabalha com modelos complexos.
7. PCR de alta fidelidade: A PCR de alta fidelidade emprega DNA polimerases com capacidade de revisão para minimizar erros durante a replicação do DNA. É essencial para aplicações como sequenciamento e clonagem de DNA.
8. PCR Digital (dPCR): A PCR digital divide a amostra em milhares de pequenas reações, permitindo a quantificação absoluta de moléculas alvo de DNA ou RNA. É altamente preciso e é usado na detecção e quantificação de alelos raros.
9. PCR inverso: A PCR inversa amplifica fragmentos de DNA com sequências conhecidas nas extremidades, tornando-a útil para estudar regiões desconhecidas que flanqueiam sequências conhecidas.
10. PCR de colônia: A PCR de colônia é usada para rastrear colônias bacterianas quanto à presença de fragmentos específicos de DNA, geralmente após experimentos de clonagem.
11. PCR de extensão de sobreposição (emenda por extensão de sobreposição ou SOE-PCR): SOE-PCR é empregado para criar moléculas de DNA quiméricas ou realizar mutagênese dirigida ao local, unindo fragmentos de DNA com sequências sobrepostas.
12. PCR assimétrico: A PCR assimétrica utiliza um excesso de um primer para amplificar preferencialmente uma fita do DNA alvo. É empregado no sequenciamento e genotipagem de DNA.

Estas são apenas algumas das muitas técnicas especializadas de PCR disponíveis, cada uma adaptada para pesquisas específicas ou requisitos de diagnóstico. Os pesquisadores escolhem o tipo apropriado de PCR com base na natureza do seu projeto e nas informações que procuram obter.