Reação em Cadeia da Polimerase, Enzimas PCR Comuns

PCR (reação em cadeia da polimerase) é uma técnica comumente usada para amplificar moléculas de DNA in vitro, e as enzimas PCR são um componente chave desta reação. Os principais tipos de enzimas PCR incluem Taq polimerase, Pfu polimerase e variantes de inicialização a quente de Taq Polimerase de DNA.

Polimerase Taq

A Taq polimerase foi uma das primeiras enzimas de PCR a ser amplamente utilizada. Foi isolado de uma bactéria conhecida como Thermus aquaticus e possui excelente resistência ao calor. A polimerase Taq é estável em altas temperaturas e é adequada para etapas de desnaturação, recozimento e extensão de PCR. No entanto, a Taq polimerase sofre uma alta taxa de erro em regiões com alto teor de GC porque não possui a função de correção de exonucleação 3′-5′.

Polimerase Pfu

A polimerase Pfu é isolada de cianobactérias termofílicas e é superior em resistência ao calor em comparação com a polimerase Taq. Possui função de correção de exonucleotídeo 3'-5', portanto possui menor taxa de erro e gera produtos de amplificação mais precisos ao amplificar regiões com alto conteúdo de GC.

Variantes de inicialização a quente da Taq DNA polimerase

Dado que a Taq polimerase necessita de ser activada a temperaturas mais elevadas, podem ser produzidos produtos não específicos no início da reacção de PCR. Para superar este problema, foram introduzidas enzimas de PCR de arranque a quente, incluindo uma variante inativa a baixas temperaturas e activável a altas temperaturas. Isto ajuda a reduzir a formação de produtos não específicos nas fases iniciais da reacção de PCR, melhorando assim a especificidade.

Uma vez que a polimerase Taq necessita de ser activada a temperaturas mais elevadas, podem ser gerados produtos não específicos no início da reacção de PCR. Para superar este problema, foram introduzidas enzimas de PCR de arranque a quente, incluindo uma variante inativa a baixas temperaturas e activável a altas temperaturas. Isto ajuda a reduzir a formação de produtos não específicos nas fases iniciais da reacção de PCR, melhorando assim a especificidade.